康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝

康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法，所得NK細(xì)胞擴(kuò)增能力強(qiáng)，活性和殺傷能力高。研究者無需優(yōu)化，而且使用步驟精簡。和競爭產(chǎn)品比較了NK細(xì)胞產(chǎn)量，活力和NK 細(xì)胞體外 陽性表達(dá)比率和殺傷能力。

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Corning    88-570-kit      NK細(xì)胞活化/擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝       1kit

康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝組成

1. NK細(xì)胞活化培養(yǎng)基

2. NK細(xì)胞活化添加劑

3. NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基

4. 抗體預(yù)包被T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶

5. 細(xì)胞培養(yǎng)袋

康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝特色

1. 擴(kuò)增能力強(qiáng)，在14天內(nèi)可達(dá)到100倍擴(kuò)增

2. 效應(yīng)細(xì)胞比例高，可達(dá)80％

3. 操作方便

自然殺傷（NK）細(xì)胞是可識(shí)別和殺死腫瘤和病毒感染的關(guān)鍵免疫細(xì)胞。 NK細(xì)胞是當(dāng)今免疫-治療常用的細(xì)胞。但是NK細(xì)胞培養(yǎng)操作難度大，對(duì)培養(yǎng)條件、培養(yǎng)技術(shù)要求很高，難以獲得高純度高效能的活性細(xì)胞。過度免疫-治療所必需的離體NK細(xì)胞很難獲得。 已經(jīng)報(bào)道了幾種NK激活/擴(kuò)增方法，其使用擴(kuò)增介質(zhì)加各種細(xì)胞因子（例如IL-2，IL-7和IL-15）。 然而，這些需要研究人員的進(jìn)一步優(yōu)化。

Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒包含預(yù)先涂覆的T-75燒瓶，50mL NK原代培養(yǎng)基，1.8mL NK Primary補(bǔ)充劑和1L NK擴(kuò)增培養(yǎng)基。 NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒前三個(gè)組分是專為NK細(xì)胞激活設(shè)計(jì)的，而NK擴(kuò)增培養(yǎng)基用于NK細(xì)胞的擴(kuò)增。 NK初級(jí)培養(yǎng)基和NK膨脹培養(yǎng)基都使用高品質(zhì)試劑和cGMP級(jí)原料制造。 NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒存在于培養(yǎng)基中的weiyi蛋白質(zhì)是血清白蛋白和重組人胰島-素的可注射水平。

Corning NK細(xì)胞活化/擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝由多個(gè)組分組成，為NK細(xì)胞培養(yǎng)提供簡便的操作方案。使用Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝所獲得細(xì)胞數(shù)量產(chǎn)量高，活性高，具有很高的殺傷效應(yīng)。

關(guān)于使用該試劑盒激活和擴(kuò)增的細(xì)胞的增殖率，免疫表型和CCK-8細(xì)胞毒性測試的信息，請參閱Corning應(yīng)用筆記使用康寧NK擴(kuò)增試劑盒（CLS-CG-AN-427）進(jìn)行人類天然殺傷細(xì)胞擴(kuò)增。

NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝操作方法

1.  抗凝血室溫離心，400 xg，10min，上層血漿轉(zhuǎn)移到新管。

2.  熱滅活自體血漿，56°C，30min。離心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血漿，培養(yǎng)備用。

3.  加入等體積PBS（不含鈣鎂）替代被移除血漿保持體積不變，小心重懸血細(xì)胞。

注意：PBS預(yù)加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血細(xì)胞活性。

4.  使用淋巴細(xì)胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs（人外周血單個(gè)核細(xì)胞）。

注意：使用新鮮采集的人血（2h內(nèi)采集）有利培養(yǎng)，不要使用超過24h的血樣。

5.  至少5倍體積的PBS（不含鈣鎂）清洗PBMCs。室溫離心500xg，10min，收集PBMCs。

6.  PBMCs稀釋到 1 x 106 cells/mL，使用NK活化培養(yǎng)基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿。

7.  預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶使用前，用PBS（不含鈣鎂）清洗兩次。

8.  添加30 mL PBMC懸液到預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶，37°C，5% CO2培養(yǎng)。

注意：第六天之前，如果培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞密度超過2.0 x 106 cells/mL，需要添加新鮮的NK活化培養(yǎng)基配比10%自體血漿，保持細(xì)胞密度大于 5 x 105 cells/mL。

9.  培養(yǎng)第六天，培養(yǎng)液離心，適量NK擴(kuò)增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）重懸細(xì)胞，再轉(zhuǎn)移到T-225培養(yǎng)瓶或透氣細(xì)胞培養(yǎng)袋。

10.  每隔兩三天，根據(jù)細(xì)胞擴(kuò)增狀態(tài)，培養(yǎng)體系中添加新鮮的NK擴(kuò)增培養(yǎng)基（1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿）保持細(xì)胞密度在5 x 105到 2.0 x 106 cells/mL之間。

注意：NK擴(kuò)增階段，所加新鮮培養(yǎng)基自體血漿含量推薦范圍：0.5%-1%。

11.  培養(yǎng)14天左右，收獲NK細(xì)胞。

注意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，細(xì)胞懸液吹打和培養(yǎng)容器拍打都要輕柔，以避免細(xì)胞損傷，保持細(xì)胞活性。

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